单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗体阳性种类特喜欢的人、寡核苷酸遮盖人工成本高或使用具体流程繁多。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯院士团队图片在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个成本低的低、跨动物群、全机构兼容的全新解决方案。

期刊论文概述

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国家微生物技术工程技术教育隐性基因与生长微生理学实验研究方案院所和国家隐性基因学好牵头的全国学术研究交流学术研究刊物，专业专注于报道范文生命值微生理学和中医学隐性基因学教育业务行业的原创文章性实验研究方案重大成就。JGG 202几年度影响力指数公式7.1，Scopus学术研究交流学术研究刊物评论指標CiteScore 9.9，跻身JCR 202几年度GENETICS & HEREDITY教育业务行业Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY教育业务行业Q1区，跻身国家微生物技术工程技术教育学术研究刊物系统分割微生理学种类别1区(Top学术研究刊物)，隐性基因学和生物技术化学与大分子微生理学小类双1区。

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那些是HEATag

合理的“二融合”制作

HEATag是由凝集素和HUH内切酶组成的容合血清

「市场定位器」控制器 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化突显（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「进行电源连接器」功能模块 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）检索长形码开展共价拼接。

“1+1>2”的郊果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行范例标识与追溯。

Fig1: HEATag各种方面标记符号的基本原理构造图

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实战经验检检

HEATag到最后有能开打？

应该在有所差异生活条件下，保持辅乳期植物血细胞核系单血细胞核混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究探讨技术团队为 HEATag 装置了多轮 “工作平稳性测试软件”，从神经元系到神经元核，从常温的到温度，从新鲜样品到加固样品，全位置印证它的平稳性和靠普性。

第二轮考试造成乳期动物界肿瘤上皮内部系：实验人数选定了来源于人、鼠、仓鼠两个鱼类的几种肿瘤上皮内部（HEK293T、K562、MEF、CHO），在空调温度使用 HEATag 标示后混测序。最终能够收废的 11447 个肿瘤上皮内部中，85.66% 都能可以通过 HEATag 长形码正确配对到原鱼类，样表间交叉的情况污染破坏稀少，UMAP 聚类定性分析定性分析也随时证明格式，HEATag 长形码与鱼类活性朋友人类基因组特性高强度同样。 立刻，检查條件进十步晋升：的研究技术人员选择在 4℃下标出丰富人体组织质核、在温度下标出甲醇稳固人体组织质核，甚至于进行标出人体组织质核核。毕竟从未显眼：那些條件下，样例标贴与外来物种消息均兼具好的有关于性，切分最准确性超 95%。然而甲醇稳固会造成的少少的转录本交错弄脏，人体组织质核核制法会现一定量 RNA 外流，人体组织质核方式的批注毕竟从未与丰富样例长期保持一样，关系证明 HEATag 会标出不一整理條件下的检测样例。

Fig2: HEATag 可在的不同状态下实现单人体细胞转录组混样分析一下

能够符号哺乳期间猎物和海洋能无脊椎骨猎物的原代上皮细胞

假如说生殖細胞系自测是 “地基题”，那组织化样版可是 “扣除题”， 等样版通常会因生殖細胞类形比较复杂、自然环境满足性专项 ，变成标注工艺的 “困惑”，而 HEATag 恰恰恰在等 “困惑” 上能够 了优越性。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组织安排，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞这不仅能被准确度差别，一切重点癌细胞款式的聚类分析法没想到都看不清楚可辨。

更令人惊喜的是HEATag对浅海动物的配适性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长条码与植物物种转录组极具较高保持统一性，是没有突然出现因高盐生态形成的 “标示已过期”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可建立辅乳期绿色集体范本几吨 scRNA-seq 讲解

Fig4: HEATag可体现鲜新海底无脊椎神经部分动物许多 scRNA-seq 介绍

HEATag与人体细胞的融合不能因起转录组的可观改变了

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在做完符号作业的一并，不太会对后面的转录多组分析出现影响，确认了实验数据源的逼真性。

Fig5: HEATag不想决定模板的 RNA 表答方法

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将来可期

HEATag 能为单神经元钻研造成 是什么？

HEATag 的价值观，远不只是于 “解决处理图标毛病”，它的灵几丁质酶性和普遍性，未能为单内部研究分析开启更高很有成功率

从采用消费场景来

HEATag 能复盖从 “简略较好定性分析”（如癌技术团队深入推进与很正常技术团队深入推进、肿瘤药物办理与比）到 “大大型总量的探究”（如技术团队深入推进細胞系图谱建模、高通芯片量淘汰）的全区域诉求。因为 PIP-seq、Stereo-cell 等新款可映射技能的进展，HEATag 还能进两步不断提升单細胞系探究的通量，助推教学科研技术团队深入推进最大大型总量的的工作。

从跨方面潜能看

HEATag 不只是实适合用于转录组学，还能与表观dna组学、核高蛋白组学、三维空间组学等新技术工艺结合在一起，经由订做目录和寡核苷酸回文序列，HEATag 就能够放松加入不相同的组学注意事项，不印象数据驯服深层次。一并，特征提取HEATag还就能够进展单组织细胞糖组学探究新技术工艺。

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达成合作动图

拜谱微生物与陈凯副教授取得开始企业项目合作意向性

必玩注意的是，在 HEATag 科技APP展现什么出庞大APP潜力股的背景图下，拜谱动物操作已与北方深海环境有效与操作上海实验操作设计室（上海）陈凯专家教授已达成初始公司合作的想法。两人操作计划努力实现 HEATag 科技APP的产业群化支撑、研发流量转化等走向刺激性进一步区域合作，促使该低直接费用、跨动物群的单癌组织核符号科技APP更加快APP于真实研发情境，为更加多实验操作设计室打造高效、性价比最高、经济社会的单癌组织核分析生产工具，电子助力研发操小说作家在癌组织核动物操作学、深海环境动物操作学、慢性病逻辑等域得到更加多挑战